Влияние глицирризиновой кислоты, глутамил-триптофана и их комбинации на экспрессию маркеров апоптоза при аллергическом контактном дерматите у крыс

Резюме. Исследовали влияние аппликаций мазевых препаратов глицирризиновой кислоты (GA), глутамил-триптофана (EW) и комбинации этих соединений (GAEW) на экспрессию маркеров апоптоза в очаге кон­тактного аллергического дерматита (КАД), индуцированного апплика­циями спиртово-ацетонового раствора 2,4 динитрохлорбензола (ДНХБ) в эксперименте на крысах. Показано, что аппликации ДНХБ сопрово­ждались формированием очага КАД, в котором отмечено увеличение экспрессии Ki, экспрессия других факторов (р-53, каспаза-3, BCL-2) бы­ла выражена меньше. При аппликации на очаг КАД крема, содержавше­го EW, экспрессия Ki была ниже, чем в не леченном контроле, но выше, чем у интактных животных, экспрессия других факторов была близка к контролю (КАД). При аппликации GA экспрессия Ki снижалась, а р-53 и каспазы-3 увеличивалась. Наибольший эффект наблюдали при одновре­менном применении обоих соединений в виде крема GAEW. Таким об­разом, активность исследованных препаратов распределилась по мере убывания следующим образом: GAEW > GA >EW.

В условиях непрерывного роста прессинга экзогенных ксенобиоти­ков на организм человека проблема аллергических контактных дерма­титов становится все более актуальной. В связи с этим большое значе­ние приобретает разработка средств и методов терапии данных, порой тяжелых и трудно подающихся лечению, заболеваний. Одним из таких направлений является разработка комплексных средств противовоспалительной направленности, в частности, производных глицирризина [2] и коротких иммуномодулирующих пептидов [1,3]. Ожидается, что применение подобных соединений, особенно в виде топических форм, снизит интенсивность воспалительного процесса и ускорит темпы репа­рации повреждений эпидермиса.

Цель работы: оценить влияние глицирризиновой кислоты (GA) и глутамил-триптофана (EW), и комбинации указанных соединений (GAEW) в виде крема для накожного применения на экспрессию рецеп­торов апоптоза в очаге контактного аллергического дерматита (КАД), индуцированного аппликациями 2,4-динитрохлорбензола (ДНХБ).

Методы. Исследования проведены на крысах самцах. КАД индуциро­вали путем 2-кратных аппликаций 5% спиртово-ацетонового раствора ДНХБ на выстриженную кожу спины крыс в течение 4-х дней. По окон­чанию аппликаций ДНХБ, животным одной группы на очаг КАД наноси­ли GA, в другой группе применяли EW, в 3-й группе применяли GAEW- все препараты применяли в виде крема. Результаты сравнивали с дан­ными, полученными на интактных животных – (интактные), живот­ные с КАД, не получавших никакого лечения (КАД). Экспрессию маркеров апоптоза определяли иммуногистохимическим методом в срезах кожи, на 14 день терапии полуколичественным методом в каждом ком- партменте кожи и выражали в относительных единицах. Группы обо­значали аббревиатурами применявшихся соединений (GA, EW, GAEW) Результаты анализа обрабатывали методами вариационной статистики. Рассчитывали достоверность различий между результатами животных, которым применяли GAEW, и остальными группами.

Таблица. Влияние аппликаций GA, EW и GAEW на экспрессию биомаркеров апоптоза в коже крыс при контактном аллергическом дерматите (М ±m)

Достоверность различий группы, получавшей GAEW: ¹ – от интактных животных; ² – от контроля (КАД); ³ – от GA; ⁴ – от EW; статистический порог до­стоверности р < 0.05.

Результаты. У животных с КАД, в клетках воспалительного ряда на­блюдалось резкое увеличение экспрессии маркера клеточной пролифе­рации Ki-67, достигавшее максимума в сосочковом слое. Наряду с этим, наблюдали достоверное увеличение экспрессии белка р-53, каспазы 3 и антиапопотогенного белка Bcl-2 достигавшее максимума в эпителии придатков кожи.

Аппликации крема, содержавшего EW, сопровождались столь же зна­чительным увеличением экспрессии Ki-65 (в 5,3-7,6 раза), максимум которого отмечен в строме сетчатого слоя. Экспрессия р-53, BCL-2 и ка- спазы-3 была увеличена до такого же уровня, как и в КАД, иначе гово­ря, EW при накожных аппликациях не изменял экспрессию указанных маркеров.

Экспрессия Ki-67 на фоне аппликаций GA была сопоставима с тако­вой у животных с КАД. Экспрессия р-53 и каспазы-3 также мало изме­нялась относительно КАД, что же касается экспрессии BCL-2, она была близка к таковой в группе интактных животных, особенно, в поверх­ностном эпителии и эпителии придатков кожи.

При аппликации крема, GAEW, наблюдалось снижение экспрессии маркера пролиферации Ki-67, по сравнению с контролем (КАД) в сред­нем в 2-3 раза

Экспрессия р-53 и каспазы-3 на фоне GAEW увеличивалась во всех компартментах кожи в среднем в 1,6-3,5 раза. Отмечено также умень­шение экспрессии BCL-2, наиболее выраженное в поверхностном эпите­лии и эпителии придатков. В глубоких слоях экспрессия данного марке­ра была существенно снижена, причем это снижение было достоверным и по отношению к результатам, полученным в группах GA и EW.

Таким образом, исследованные препараты обладают выраженной способностью регулировать процессы апоптоза в очаге КАД. Актив­ность исследованных препаратов распределилась следующим образом (по мере убывания): GAEW > GA >EW.

Литература: