Экспериментальные исследования комплекса лекарственных средств, включавшего бендазол, тимоген натрий и аскорбиновую кислоту, а также описанный выше опыт применения этого комплекса в клинической и эпидемиологической практике показали его высокую эффективность при профилактике и лечении ОРВИ и гриппа. В процессе дальнейших исследований было экспериментально установлено, что активные компоненты комплекса сохраняют свою активность при одновременном пероральном введении. Как известно, бендазола гидрохлорид существует в виде таблеток для перорального введения под коммерческим названием «Дибазол», аскорбиновая кислота давно и успешно применяется перорально как средство для витаминизации организма. Анализ химической структуры показал, что бендазол, тимоген натрий и аскорбиновая кислота не вступают в химические реакции между собой, что позволяет совместить их в одной лекарственной форме. Представленные в предыдущей главе материалы, по существу, экспериментально подтвердили противовирусную эффективность сочетания лекарственных субстанций при их одновременном пероральном введении.

В результате была создана единая лекарственная форма, традиционно названная нами Цитовир-3®, включающая в себя 50 мг аскорбиновой кислоты, 20 мг бендазола и 0,5 мг тимогена натрия. Как видно из приведенного состава, дозы препаратов, образующих лекарственную форму, за исключением тимогена натрия, не превышают допустимых разовых доз. Что касается последнего, то увеличение разовой дозы до 0,5 мг обусловлено изменением способа применения с интраназального на пероральный. Фармакокинетические исследования показали, что при этом способе применения до 80% вещества разрушается в печени, превращаясь в две свободные аминокислоты, используемые организмом в биосинтетических целях. И только оставшиеся 0,1 мг оказывают необходимое фармакологическое действие.

Выбирая собственно лекарственную форму, пригодную для перорального введения, мы стремились по возможности ограничить контакт лекарственных веществ с содержимым желудка. По этой причине, мы отказались от таблетированной формы, а остановились на капсулах. Как известно при приеме натощак капсула достаточно быстро элиминируется из желудка в двенадцатиперстную, а затем и тощую кишки, где, собственно, капсула распадается, и активные компоненты попадают в просвет кишки, содержимое которой имеет нейтральное или слабощелочное значение рН. В качестве наполнителя была использована лактоза. Смесь расфасовывается в желатиновые капсулы № 3.

Готовая лекарственная форма была подвергнута полному токсикологическому исследованию. Для определения острой токсичности препарат перорально вводили самцам и самкам белых мышей и крыс с последующим расчетом величины ЛД50 (рис. 2).

Рис. 2. Острая токсичность Цитовира-3® для мышей и крыс при пероральном методе введения препарата

ris-2-ostraya-toksichnost-citovira-3-dlya-myshej-i-krys-pri-peroralnom-metode-vvedeniya-preparata

По оси ординат: доза препарата мкг/кг.

Полученные результаты показали, что Цитовир-3® относится к нетоксичным препаратам. Наибольшую чувствительность к препарату продемонстрировали мыши (ЛД50 для самок составило 3040±650 мк/кг, для самцов – 4400±1741 мг/кг, различия недостоверны. Крысы несколько более устойчивы: ЛД50 для самок равно 5660±1163 мг/кг, для самцов – 7264±816 мг/кг, различия недостоверны. Результаты наблюдений за животными показали, что однократное пероральное введение Цитовир-3® в дозах до 2500 мг/кг, не вызывало изменений поведения и общего состояния животных. Не отмечено также изменений массовых коэффициентов органов относительно контрольных животных. При гистологическом обследовании не выявлено микроскопических изменений головного мозга, внутренних и эндокринных органов подопытных животных, а также не установлено признаков раздражения или некроза слизистых оболочек желудка и кишечника.

При определении подострой токсичности кроликам ежедневно перорально через зонд вводили до 31 мг/кг Цитовира-3®. В процессе наблюдения не отмечено никаких изменений параметров общего состояния: динамики массы тела, ректальной температуры, количества съеденной пищи), а также функционального состояния сердечно-сосудистой системы (ЭКГ), костного мозга и периферической крови, печени и почек. При некропсии животных, забитых после окончания срока наблюдения, также не выявлено никаких патологических изменений в органах и тканях животных, которые можно было бы связать с приемом препарата.

В процессе исследования хронической токсичности препарата также не выявлено каких-либо патологических изменений в организме подопытных животных (кроликов и собак).

Таким образом, полученные результаты позволили сделать вывод о том, что препарат нетоксичен как при остром, так и при подостром и хроническом введении, что дало основание сделать вывод о безопасности лекарственного препарата Цитовир-3®. В совокупности с результатами экспериментального исследования препарата и клинического применения комплекса средств Цитовир-3® для профилактики и лечения ОРВИ и гриппа комплексное лекарственное средство Цитовир-3® было разрешено к клиническому применению у взрослых и детей с 6 лет. В окончательном варианте препарат Цитовир-3® представляет собой порошок, содержащий (в одной капсуле): бендазола — 0,02 г, тимогена натрия — 0,0005 г, аскорбиновой кислоты — 0,05 г, вспомогательный веществ (сахар молочный, кальция стеарат) до массы 0,17 г. В одной стандартной упаковке содержится 12 капсул — 1 курсовая доза.

Капсульная форма Цитовира-3® достаточно удобна для детей от 6 лет и взрослых, но применение ее детям меньшего возраста проблематично вследствие неспособности этих детей проглатывать капсулу неповрежденной.

В связи с этим обстоятельством нами была разработана специальная лекарственная форма Цитовир-3® сироп для детей. В своем составе препарат содержит (в пересчете на 1 суточную дозу, равную 12 мл): бендазола — 15 мг, тимогена натрия — 1,8 мг, кислоты аскорбиновой — 150 мг, сиропа сахарного 60% до 12 мл. Препарат не содержит пищевкусовых добавок и красителей.

В процессе доклинического исследования Цитовира-3® сиропа для детей исследовали острую, подострую токсичность на неполовозрелых крысятах и крольчатах. Для определения острой токсичности готовую лекарственную форму препарата вводили неполовозрелым крысятам массой 30-35 г. перорально через атравматический металлический зонд. Большие дозы препарата вводили в несколько приемов в течение 6 час. За животными наблюдали в течение 14 дней, ежедневно регистрируя количество павших особей, после завершения срока наблюдения рассчитывали величину ЛД50 (табл. 6).

Таблица 6. Токсичность препарата Цитовир-3® сироп для детей

Доза, мг/кг,	375,5	695,0	903,5	1112,0	1529,0
объем, мл/кг	25	50	65	80	110
Эффект, пало животных/всего	0/6	0/6	0/6	3/6	6/6
ЛД50, мг/кг	1220,9±229,0

По окончании срока наблюдения животных забивали, а органы и ткани подвергали патологоанатомическому и гистологическому исследованию, в процессе которого не выявлено никаких патологических изменений в органах и тканях животных.

Полученные экспериментальные данные показали, что препарат обладает низкой токсичностью, варьирубщей в пределах 1200 мг/кг, что соответствует токсичности субстанции препарата Цитовир-3® в капсулах (рис. 2). При однократном внутрижелудочном введении препарата в меньших дозах (до 900 мг/кг) беспородным крысятам у них не наблюдается каких-либо изменений в поведении и общем состоянии, динамика нарастания массы тела опытных животных не отличалась от таковой у контрольных животных, получавших аликвотное количество дистиллированной воды. При некропсии не отмечено различий между животными опытной и контрольной групп по массовым коэффициентам внутренних органов, микроскопической картине тканей головного мозга, внутренних и эндокринных органов. Не выявлено признаков раздражения, воспаления и некроза на слизистых оболочках желудка и кишечника — местах первичного контакта препарата с тканями животного.

В подостром эксперименте изучено влияние препарата в дозах 83,4 мг/кг (6 мл/кг) и 417 мг/кг (30 мл/кг) в опытах на крысятах (превышение суточной дозы в 10 и 50 раз), а также в дозах 8,34 мг/кг (0,6 мл/кг) и 83,4 мг/кг (6,0 мл/кг) в опытах на крольчатах (превышение суточной дозы препарата в 10 раз). Препарат вводили внутрижелудочно в течение 30 дней. По окончанию срока наблюдения животных забивали для последующего патологоанатомического и гистологического исследования. Исследование сопровождали контролем, в котором животным вместо препарата вводили аликвотное количество дистиллированной воды.

В процессе наблюдения за подопытными животными не выявлено каких-либо различий между опытными и контрольными животными по интегральным параметрам общего состояния (вес, ректальная температура, количество съедаемой пищи и потребляемой воды). Не выявлено также отличий и по результатам функциональных тестов (продолжительность гексеналового сна, показатели двигательной активности, состояние сердечно-сосудистой системы), а также по биохимическим и морфологическим показателям крови и мочи и миелограммы. При патологоанатомическом и гистологическом исследованиях не выявлено каких-либо дистрофических, деструктивных очаговых склеротических изменений в паренхиматозных органах, строме внутренних органов. Не выявлено признаков воспаления и некроза на слизистых оболочках желудка и кишечника — местах первичного контакта с препаратом.

Таким образом, разработанный препарат Цитовир-3® сироп для детей является абсолютно безопасным при его применении в дозах, превышающих разовую терапевтическую в 10 раз и курсовую терапевтическую — в 70 раз. В окончательном варианте препарат Цитовир-3® сироп для детей содержит в пересчете суточную дозу (12 мл): бендазола — 15 мг, тимогена натрия — 1,8 мг, кислоты аскорбиновой — 150 мг, сиропа сахарного 60% до 12 мл. Препарат выпускается во флаконах в объеме 50 мл (одна курсовая доза для детей в возрасте 3 — 5 лет. Разовые дозы в зависимости от возраста ребенка составляют от 1 года до 3-х лет — 2 мл сиропа 3 раза в день в течение 4-х дней; для детей в возрасте от 3-х до 6 лет — 4 мл за 30 мин до еды 3 раза в день в течение 4-х дней.

Резюмируя представленные выше результаты исследований по острой и подострой токсичности лекарственных форм препарата Цитовир-3®, подчеркнем, что препарат показал очень низкую токсичность, позволяющую отнести его к категории нетоксичных лекарственных средств. Препарат, примененный в разработанных лекарственных формах, показал отсутствие каких-либо патологических изменений при его применении в дозах, в десятки раз превышающих разовые и курсовые терапевтические дозы. Препарат не показал каких-либо токсических и аллергических свойств. С учетом полученных данных исследователями обоснованно был сделан вывод о безопасности препарата Цитовир-3® в разработанных лекарственных формах и схемах применения.